Hpv emberi sejtvonal

Válasz a szerkesztõ levélre: A HPV-18 jelen van az emberi mellrák sejtvonalakban

Ebben a vizsgálatban olyan replikációs hiányos rekombináns adenovírust fejlesztettünk ki, amely p73 β-t expresszál Ad-p Az ad-pfertőzött sejtek csökkent sejt-DNS-szintézist mutattak, a sejtciklus G1-fázisában leállt és apoptózis indukálta. Az Ad-p73 gátolta a különböző típusú ráksejtek növekedését. Ennél is fontosabb, hogy az Ad-p73 gátolta a HPV E6 gént hordozó sejtvonalak növekedését, amelyet stabil integrációval vezettünk be, hatékonyabban az Ad-phoz képest.

Továbbá az Ad-p73 szintén nagyon hatékonyan gátolta a HeLa sejtek, a méhnyakrákból származó sejtvonal növekedését. Az Ad-p73 képessége, hogy gátolja a HPV E6-expresszáló sejtek és HeLa-sejtek növekedését, korrelált a funkcionális p73 stabil expressziójával E6 jelenlétében.

Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az Ad-p73 potenciális génterápiás szerként alkalmazható a méhnyakrák ellen. Bevezetés A méhnyakrák a nőkben a második leggyakoribb malignitás.

You Guys Should Get the HPV Vaccine, Too szemölcs papillómák

Így a túlélési arány alacsony szintje erősen utal az új terápiák kifejlesztésére. A méhnyakrák legfontosabb kockázati tényezője a humán papillomavírus HPV fertőzés. Számos kísérleti bizonyíték arra utal, hogy a HPV E6 és E7 onkogénjei jelentős szerepet játszanak a méhnyakrák rosszindulatú fenotípusának kialakulásában és fenntartásában.

A HPV 16 E6 és E7 a cervikális sejtekben a két főbb tumorszuppresszor fehérjét, a p53 és a retinoblasztómát Rb célozza Scheffner és munkatársai, Az E6 fehérje komplexet képez pval Storey és mtsai.

Hpv emberi sejtvonal méhnyakrák kezelésére számos gén alapú megközelítést fejlesztettek ki. Bár a p53 génnek a pat hordozó adenovíruson keresztül történő bevezetése gátolja a méhnyakrákból származó sejteket Hamada és mtsai. Prabhu et al. A ppolog homológja a phoz hasonló funkciókat mutat be a transzkripciós aktiválásban és az apoptózisban Jost és mtsai.

Ezenkívül a p73, szemben a pmal, ellenáll a HPV 16 E6 degradációjának, és elnyomhatja a növekedést és apoptózist indukálhat HPV 16 E6-expresszáló sejtekben Prabhu et al. Ezt követően megállapítottuk, hogy az adenovírus E1B, SV40T antigén és HPV E6 vírusos onkogén termékek termékei nem fizikailag kölcsönhatásba lépnek a pval Marin és munkatársai, Az hpv emberi sejtvonal tény, hogy a p73 képes gátolni a sejtek növekedését HPV E6 jelenlétében, felveti annak a lehetőségét, hogy a p73 alkalmas alternatív jelölt a méhnyakrák génterápiájára.

Ebben a vizsgálatban egy p73 β-t expresszáló replikáció-hiányos rekombináns adenovírust fejlesztettünk ki Ad-p Ennél is fontosabb, hogy megmutatjuk, hogy az Ad-p73, de nem az Ad-p53 hatékonyabban gátolta a három különböző típusú HPV E6 expresszáló ráksejtvonalak, valamint a HeLa sejtek, amelyek a méhnyakrákból származó sejtvonalat.

Az eredmények alapján azt javasoljuk, hogy a pt expresszáló adenovírus Ad-p73 potenciális reagens lehet a méhnyakrák kezelésére.

paraziták gyakran benne

A fertőzés után 24 órával a sejteket fixáltuk és p73 fehérjére festettük. Az ad-pfertőzött sejtek intenzív nukleáris festést mutatnak az Ad-LacZ-fertőzött sejtekhez képest 1a. Ábra, összehasonlítva a panelt a b-vel. Ábra, összehasonlítva a 2. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy egy funkcionális p73 az Ad-pból expresszálódik. Az ad-pval fertőzött sejtek funkcionális pat expresszálnak.

a papillómák kezelése a testen nőknél

Teljes méretű kép Az Ad-p73 fertőzés sejtciklus letartóztatást és apoptózist indukál Kimutatták, hogy a p73 exogén expressziója növekedési letartást és apoptózist indukál Jost és munkatársai, ; Kaghad és munkatársai, Az Ad-pból sejtciklusra kifejtett p73 hatásának megértéséhez teszteltük a sejt-DNS szintézis mértékét és a sejtciklus profilját az Ad-pfertőzött sejtekben. Az SW sejtek Ad-pval történő fertőzése drasztikusan csökkentette a Brdu-t tartalmazó sejtek százalékos arányát az Ad-LacZ sejtekhez képest 2a.

gége papillomatosis prevalenciája

Ábra, összehasonlítva a d panelt a b panellel. Ábrán kapott eredményeket számszerűsítettük, és a Brdu beépülését különböző körülmények között a 2b.

A celluláris DNS-szintézist szintén [3H] timidin beépítésével mértük. Az SW sejtek Ad-pval történő fertőzése a [3H] timidin beépülésének csökkenését eredményezte 2c. Ábraami a DNS-szintézis gátlására utal. Az Rb foszforilációs állapota korrelál a DNS szintézis mértékével 2d.

peritoneális rák nz

A hipofoszforilált Rb-t az Ad-pfertőzött sejteknél az Ad-LacZ-fertőzött sejtekhez képest látjuk 2d. Az hpv emberi sejtvonal a és c panelek ugyanabba a régióba tartozó sejtek DAPI festései, mint az a panelek b hpv emberi sejtvonal d panelei.

A sejteket a [3H] timidinbe beépítettük az utolsó 4 óráig, amikor azokat összegyűjtöttük. Ad-LacZ-fertőzött sejtek. A DNS-szintézis gátlása nyilvánvaló az Ad-pfertőzött sejtekben már 24 órával, amint azt Brdu beépülése 2b. Ábra[3H] timidin beépülése 2c. Ábra és áramlási citometriás adatok látják 3a.

Tehát a DNS-szintézis gátlása, amely az Ad-pfertőzött sejtekben növekedési letartóztatáshoz vezet, nagyon nyilvánvaló. A sejteket a fertőzés után 12, 24 és 48 óra elteltével összegyűjtöttük és hpv emberi sejtvonal citometriás elemzésnek vetettük alá, ahogy azt az Anyagok és módszerek említik. A sejtek számára lehetővé tették Brdu beépítését az utolsó 4 óráig, amikor azokat összegyűjtöttük. A számszerűsített értékeket az ábra alján adjuk meg. A teljes sejtkivonatot a vírusfertőzés után megadott időpontok után állítottuk elő, és a PARP-nek Western-analízisnek vetettük alá.

Megjegyezzük, hogy a b, d és f panelekben a fényes kék fluoreszcenciával rendelkező foltok jelzik a nukleáris fragmentáció jelenlétét Teljes méretű kép A DNS-szintézis gátlása mellett a FACS az apoptózis indukcióját is mutatja az Ad-pfertőzött sejtekben 3a. Ábra, 5. Ezenkívül az apoptózis során hpv emberi sejtvonal nukleáris fragmentációt is megfigyeltük a sejtek DAPI-vel történő festésével és fluoreszcens mikroszkóppal való megjelenítésével 3c.

Az ad-pval fertőzött SW b panelH d panel és H f panel fényes kék fluoreszcenciát mutat, amely az ad-LacZ-fertőzött sejtekhez képest nukleáris fragmentációra utal. Az hpv emberi sejtvonal indukciója a p73 túlexpresszióra adott válaszként 48 órával az áramlási citometria-adatok 3a. Ábra és a DAPI-festés 3c. Ábra szerint történik.

Hpv emberi sejtvonal - terraparkfitness.hu

A PARP hasítási vizsgálat azt sugallja, hogy az apoptózis indukciója a p73 túlexpresszió 36 órával 3b. Ábra történik. Összességében a fenti eredmények arra utalnak, hogy a sejtek Ad-pval történő fertőzése növekedési letartóztatást és apoptózist indukál. Hpv emberi sejtvonal ad-p73 gátolja a rákos sejtek növekedését Az Ad-p73 citotoxicitásának vizsgálatához az Ad-p73 három különböző sejtvonal növekedését gátló képességét vizsgáltuk, amelyek pállapotukban különböznek. H, humán tüdő karcinóma sejtvonal WT p53 kikötők ; SW, humán vastagbél-karcinóma sejtvonal kikötő mutáns p53 ; és Saos-2, egy humán osteosarkóma sejtvonal mindkét p53 allél törlésre került.

Az Ad-p73 nagyon hatékonyan gátolta az összes három sejtvonal növekedését az Ad-LacZ-hez képest 4a — c ábra. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az Ad-p73 a ráksejtek növekedésének erős inhibitora. Annak ellenőrzésére, hogy az Ad-p73 gátolhatja-e a HPV E6-ot hordozó rákos sejteket, három különböző ráksejttípusból álló HPV E6 stabil transzfektánsokat használtunk, amelyek vad típusú pat hordoztak.

Kontroll sejtekként ugyanazokat a sejtvonalakat használtuk, amelyeket üres vektorral transzfektáltunk NEO-ként jelöltek.

Caski sejtvonal hpv | Gél Papillor

Emellett a méhnyakrákból származó HeLa sejtvonalat is használtuk. Először minden NEO és E6 klón p53 állapotát igazoltuk. Mindhárom sejttípus mind NEO, mind E6 változatát adriamicinnel kezeltük, majd a p53 szintet Western blottal ellenőriztük 5.

Ismert, hogy az adriamicin DNS-károsodást okoz és a pszinteket vad típusú ptartalmú sejtekben indukálja.

HPV and Cervical Cancer okoz-e viszketést a hpv vírus?

A HPV E6-tartalmú sejtekben azonban az adriamicin-kezelés után nem várható szignifikáns változás a pszintekben. Hasonlóképpen, a méhnyakrákból származó HeLa-sejtek nem mutattak ki pindukciót az adriamicin kezelés során 5. A HPV E6 stabil klónok képtelensége a p53 stabilizálására adriamicin kezelésre adott válaszként azt sugallja, hogy a p53 lebomlik az E6 stabil vonalakban, és felhasználhatók az Ad-p73 citotoxicitási vizsgálatokban.

A p53 nem stabilizálódik a HPV E6-expresszáló sejtekben a DNS-károsodás hatására: a jelzett sejteket adriamicinnel kezeltük 24 órán át. A teljes sejtkivonatokat Western-analízisnek vetettük alá p53 és aktin fehérjékhez, ahogy azt az Anyagok és módszerek című leírásban leírtuk Teljes méretű kép Ezután ellenőriztük az Ad-p73 azon képességét, hogy gátolja a HPV E6 expresszáló sejtek és a méhnyakrákból származó HeLa sejtek növekedését.

Hasonlóképpen, a méhnyakrákból származó HeLa sejtvonal szintén az Ad-pnak nagyon hatékonyan, de nem az Ad-pmal gátolt növekedést 7. És h ábra. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az Ad-p73 nagyon hatékonyan gátolja a HPV E6-expresszáló ráksejtek és a méhnyakrákból származó hpv emberi sejtvonal növekedését. Teljes méretű kép A fenti eredmények azt sugallják, hogy az Ad-p73, de nem az Ad-p53 képes hatékonyan gátolni a HPV E6 gént expresszáló sejtek növekedését.

BIOLÓGIAI EVOLÚCIÓ: HeLa – a világ leghíresebb emberi sejtjei, Hpv emberi sejtvonal

Az Ad-pnak a HPV E6-expresszáló sejtek gátlására való képtelensége az E6 jelenlétének tulajdonítható, melynek terméke a phoz kötődik, ami a p53 ubikitin által közvetített proteolíziséhez vezet Lechner és Laminis, hpv emberi sejtvonal Storey et al. Ezeknek a tényeknek a megerősítése érdekében megvizsgáltuk a p53 és p73 stabilitását az adenovírusból a HPV E6 expresszáló sejtekben és HeLa sejtekben.

Azonban az Ad-pból expresszált p73 stabil volt minden vizsgált sejtvonalban 8b. Mindhárom sejtvonal mind NEO, mind E6 transzfektánsai hasonló szintű indukált pértékeket mutatnak az Ad-p73 fertőzésnél 8b.

Hasonlóképpen a p73 is stabil a méhnyakrákból származó HeLa sejtvonalban 8b. Ezek az eredmények megerősítik, hogy a rekombináns adenovírusból expresszált p73, de nem p53 stabil és funkcionális a HPV E6 fehérje jelenlétében. Kidolgoztunk egy replikáció-hiányos adenovírust, amely p73 β-t hordoz, amely funkcionális p73 fehérjét expresszál.

Az ad-p73 gátolta számos ráksejt növekedését, különösen a HPV E6-expresszáló sejteket, valamint a méhnyakrákból származó HeLa-sejteket. Hpv emberi sejtvonal p53 tumorszuppresszor egy erős növekedési inhibitor, mivel képes gátolni a növekedést a sejtciklus progressziójának gátlásával, valamint az apoptózis indukálásával. A p53 inaktiválása nemcsak a tumor kialakulását eredményezi, hanem számos ráktípusban is kemoresisztenciát eredményez.

Ezért a vad típusú p53 bevitele a tumorsejtekbe a növekedést gátló útvonalak aktiválódását eredményezi, ami a tumorsejteket kemoterápiás gyógyszerekkel szemben érzékenyvé teszi. Ezen okok miatt a palapú génterápiát nagyon hatékonynak találták számos ráktípus ellen. A palapú génterápia azonban bizonyos körülmények között nem hatékony. Az mdm-2 amplifikációja Oliner és munkatársai, ; Haupt és munkatársai, ; Kubbutat és mtsai.

Hasonlóképpen, a méhnyakrákból származó sejtek rezisztensek a p53 által közvetített növekedési szuppresszióval, ami annak a ténynek köszönhető, hogy a HPV onkogén E6 terméke a phoz kötődik a p53 degradációjához ubiquitinációval Prabhu et al. A méhnyakrák kezelésére több alternatív jelöltgént vagy módszertant próbáltak meg. Úgy találtuk, hogy az adenovíruson keresztül bevitt proapoptotikus génbax hatékonyan indukálja az apoptózist a méhnyakrákból származó sejtekben Huh és mtsai.

Megpróbáltuk a palapú megközelítést a méhnyakrákos sejtek növekedésének hatékony gátlására.

A történelem módosítása

Ezen túlmenően a p73 gátolta a HPV E6 onként expresszáló rákos sejtek növekedését is nagyon hatékonyan a ptól eltérően Prabhu et al. Vizsgálatunkban az adenovírusból expresszált p73 hatékonyan gátolta a HPV E6 oncoegne-t expresszáló három különböző rákos sejtvonal növekedését 6.

Emellett a p73 gátolta a méhnyakrákból származó HeLa sejtek növekedését is 7. Azt találtuk, hogy az adenovírusból expresszált p73 HPV E6-expresszáló sejtek gátlásának képessége az említett sejtekben a p73 stabil expressziójának köszönhető 8b.

Azonban egy adenovírusból expresszált p53 nem tudta hatékonyan gátolni a HPV E6-expresszáló sejteket, ami összefüggésben hpv emberi sejtvonal azzal, hogy a p53 nem stabil E6-expresszáló sejtekben 8a. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az Ad-palapú megközelítés lehet a méhnyakrák lehetséges génterápiás stratégiája.

a szemölcsök megfertőzésének módja

Bert Vogelstein, Johns Hopkins Egyetem szolgáltatta. A humán tüdőkarcinóma H sejtvonal homozigóta ptörlést hordoz, és kedvesen biztosította Dr. A sejtekbe történő transzfektálást kalcium-foszfát módszerrel végeztük Somasundaram és munkatársai, A fent leírt eljárással állítottuk elő He és hpv emberi sejtvonal.

A megfelelő rekombináns plazmidot hordozó klónokat azonosítottuk, plazmid DNS-t extraháltunk, PacI- vel linearizáltuk és sejtekbe transzfektáltuk. A rekombináns vírusplakkokat lokalizált tisztítási területekként azonosítottuk, amelyek körkörös sejtekből álltak, amelyek fluoreszcens mikroszkóppal zölden fluoreszkálnak.

Az adenovírus-fertőzést a leírtak szerint hajtottuk végre Somasundaram és El-Deiry, A sejteket összegyűjtöttük vagy 24 órán keresztül rögzítettük, vagy megfelelő időpontokban, amint azt a vírusfertőzés után leírtuk és elemeztük. DNS-szintézis gátlása A Brdu beépülését Zeng és munkatársai, és a hpv emberi sejtvonal timidin beépülését Somasundaram és El-Deiry, a korábban leírtak szerint hajtottuk végre.

A kísérletet 4 óra elteltével leállítottuk, miután ezeket a vegyületeket hozzáadtuk, és a DNS-szintézist mérjük anti-Brdu antitest Ab-3; Oncogene alkalmazásával vagy a szcintillációs számláló radioaktivitásának mérésével.

Brdu-t 20 μ M adtunk a sejtekhez 4 órával a betakarítás időpontja előtt. A sejteket PBS-sel kétszer mostuk, és tripszinnel összegyűjtjük. Ezt követően a sejteket centrifugáltuk, és a pelletet 2 n sósavoldatban szuszpendáltuk, és szobahőmérsékleten 30 percig inkubáltuk. A sejteket egyszer mossuk PBS-sel, majd 4 μg ribonukleáz A-val Roche inkubáljuk 30 percig szobahőmérsékleten.

Összesen 1, 5 × sejtet üregenként 96 lyukú lemezre szélesztettünk. Az MTT egy tetrazolium só, amelyet élő sejtek kék formazán kristályokká alakítanak át.

Fontos információk